pGLO-­transforma­tion hos E. coli

Her kan du se et uddrag af rapportens eksempel på et teoriafsnit

Vores forsøg indebærer, at vi får E. coli-bakterier til at udføre transformation i laboratoriet. Vi ønsker at transformere bakterierne med et gen, der koder for grønt fluorescerende protein (GFP). Genet findes naturligt hos goplen Aequorea victoria, hvor GFP gør goplen selvlysende, hvis proteinet har absorberet uv-lys. En vellykket transformation betyder, at bakterierne kan producere GFP og derfor også lyser op, hvis de belyses med uv-lys. Transformationen indebærer på den måde, at der sker kunstig overførsel af genetisk materiale fra én organisme til en anden, hvilket også kaldes for gensplejsning.

Vi benytter i forsøget nogle plasmider, som fra producentens side i forvejen indeholder nogle bestemte gener. Producenten har indsat generne i plasmidet ved at klippe plasmidet og de ønskede gener med de samme restriktionsenzymer. Restriktionsenzymer kan genkende en bestemt basesekvens i DNA og klippe DNA-strengen over ved denne basesekvens. Klipningen har danner såkaldte "sticky ends" på de opklippede stykker DNA, dvs. områder med uparret DNA i hver ende af stykkerne. Sticky ends på plasmider og udklippede gener kan binde til hinanden, hvis DNA'et er klippet med samme restriktionsenzym. Plasmidet kan på den måde optage et ønsket gen, inden ringstrukturen lukker sig igen. Plasmidet kan derefter...