Spektrofotometri

Hvad er spektrofotometri?

Spektrofotometri er en metode til at bestemme en opløsnings absorbans. Absorbansen er et udtryk for, hvor meget lys opløsningen absorberer, når lys med en bestemt bølgelængde sendes igennem opløsningen. Jo mere opløst stof eller jo flere celler, der er i opløsningen, jo større er absorbansen.

Absorbansen er et tal uden enhed. En absorbans på 0 betyder, at opløsningen ikke absorberer noget lys med bølgelængden. En absorbans på 1 betyder, at 90 % af lyset absorberes, og en absorbans på 2 betyder, at 99 % absorberes osv. Absorbansen for en opløsning er oftest et tal mellem 0 og 1.

Spektrofotometri kan bruges til:

• at bestemme stofkoncentrationen i en opløsning (eller mængden af celler i en cellekultur). Opløst stof absorberer lys, så jo større opløsningens stofkoncentration er, jo større er absorbansen.
• at opstille et absorptionsspektrum for et bestemt stof. Et absorbtionsspektrum viser, hvor meget lys stoffet absorberer ved forskellige bølgelængder.

Absorbansen måles med et spektrofotometer

En opløsnings absorbans måles med et spektrofotometer. Spektrofotometeret er en maskine med denne opstilling indeni:

En kuvette (en lille gennemsigtig beholder) fyldes med opløsningen og placeres i spektrofotometeret. Lyset fra lyskilden sendes igennem et prisme, som spreder lyskilden ud i et spektrum. Gitteret sørger så for, at kun lys med den ønskede bølgelængde passerer igennem kuvetten. Et display uden på spektrofotometeret viser til sidst opløsningens absorbans ved den ønskede bølgelængde.

Spektrofotometeret skal normalt kali...