Bioteknologi A HTX 2018 - Vejledende opgavesæt 1

Her kan du se et uddrag af besvarelsen af sættets opgave 3.4 om bioplast:

Forklar hvordan man har fremstillet plasmidet pBE2C1AB ud fra plasmiderne pBE2C1 og pJM9131.

Plasmidet er fremstillet ved såkaldt rekombinant DNA-teknik. Figur 3 viser, at plasmiderne pBE2C1 og pJM9131 begge indeholder restriktionssitet Pst 1. Man kan overføre de to plasmider til en opløsning, der indeholder restriktionsenzymet, som klipper ved Pst 1. Restriktionsenzymet klipper nu plasmidernes DNA over skævt ved hvert Pst1-restriktionssite, så der opstår såkaldte "sticky ends". Det betyder, at plasmiderne nu er klippet op til en masse mindre stykker DNA, hvis ender kan binde sig til hinanden. De mindre DNA-stykker kan sætte sig sammen på mange forskellige måder. Her er man interesseret i, at et opklippet pBE2C1-plasmid binder sig til den del af pJM9131-plasmidet, som indeholder phaAB-genet. Herefter skal det opklippede plasmid lukke sig igen, hvorefter det nye sammenklippede plasmid kaldes for pBE2C1AB. Man kan udvælge plasmider med denne gensammensætning ved at få Baccillus subtilis-bakterier til at optage plasmiderne fra opløsningen. Herefter dyrker man bakterierne på agarplader med en bestemt sammensætning. Vi kan se, at det ønskede plasmid indeholder genet Amp, som koder for resistens mod en bestemt type antibiotika. Bakterier uden Amp-genet kan ikke vokse på agarplader, hvor denne type antibiotika er til stede, og dyrkning på disse plader viser os altså, hvilke bakterier der indeholder DNA'et fra pBE2C1-plasmidet. Nu vil vi gerne udpege de bakterier, som har optaget et plasmid sammensat af både pBE2C1-DNA'et og phaAB-genet fra pJM9131. Det kan vi sandsynligvis nemmest gøre ved at...