pGLO-transformation hos E. Coli - Rapport

  • STX 3.g
  • Biologi B
  • 12
  • 10
  • 2295
  • PDF

pGLO-transformation hos E. Coli - Rapport

Forsøg, der undersøger transformation af pGLO plasmid af E coli bakterier ved gensplejsning.

Først redegøres der for pGLO transformation i teoriafsnittet, hvorefter vi viser pGLO transformation i vores forsøg.

Formål
Det overordnede formål med denne opgave er at udføre og forstå fremgangsmåden ved en genetisk transformation - pGLO transformation - samt at vurdere i hvilken grad dette lykkes.

Det praktiske formål er at transforme et plasmid med ampenicillinresistens samt et gen der koder for Grønt Fluorescerende Protein(GFP) ind i E coli bakterier.

Indhold

Formål
Teori
Hypotese
Materialer
Forsøgets udførelse
Resultater
Fejlkilder og usikkerheder
Konklusion
Diskussion
Litteraturliste

Uddrag

Forsøget, "pGLO Transformation"s, udførelse
(De lukkede eppendorfrør er mærkede som vist herunder i forvejen, og selve gensplejsningen er også gjort på forhånd idet man har lavet et plasmid med ampenicillinresistens og GFP gener)

Først åbnes cellemembranen ved at tilføre 250µL Transformation Solution (CaCl2) til hvert rør. Rørerne køles i isvandbade, så arbejdet holdes sterilt.
Herefter tilføres bakteriekolonierne via sterile podenåle til eppendorfrørerne med + og – pGLO.
Det er her vigtigt at hele bakteriekolonien blandes.

Med en ny steril podenål tages en loop-fuld plasmideopløsning til røret + pGLO, og dette blandes. Rørene gøres nu klar ved at lade dem stå på is i 10 minutter, og herimens mærkes pladerne som vist herunder.

Cellerne udsættes nu for et varmechok, der bevirker at menbranerne åbnes. Dette gøres ved at flamingobeholderen med rørene fra isbadet overføres til et varmebad på 42 oC i nøjagtig 50 sekunder. Rørene skal efter dette stå i isbadet igen i præcis 2 minutter. Efter denne temperaturbehandling sættes rørene ved stuetemperatur, og der tilsættes via en steril pipette 250µL LB-medium til begge DNA rør. Sådan skal de stå i endnu 10 minutter, og dette gøres for at hjælpe cellevæksten i gang.

Efter dette overføres 100µL bakterier til hvert rør på de rette mærkede plader, og her er det vigtig at der tages en ny steril podenål for på hver plade at dele bakterierne ud på pladen. Pladerne stakkes nu og stilles med bunden i vejret i varmeskabet ved 37oC, da stuetemperatur er den bedste for bakterievækst... Køb adgang for at læse mere

pGLO-transformation hos E. Coli - Rapport

[26]
Bedømmelser
  • 04-11-2012
    Givet af 3.g'er på STX
    Opgaven hjalp mig utrolig meget, da jeg selv skulle skrive en rapport omkring pGLO transformation. Dog kunne jeg tænke mig, at den var en anelse mere overskuelig. Men alt-i-alt en glimrende rapport(!) :-)
  • 07-02-2011
    Denne rapport er bare lige i øjet! Gennemarbejet og velskrevet - der er masser af inspiration at finde. Svarer på alt om pGLO!!! Havde aldrig klaret mig uden denne rapport.
  • 27-11-2018
    Givet af 3.g'er på STX
    Meget af teorien er taget direkte fra øvelsesarket, så desværre ikke til meget hjælp mht. det.
  • 17-05-2015
    .........................................................