Restriktionsanalyse (RFLP)
...
RFLP bruges til DNA-profiler og diagnosticering af sygdomme
RFLP-analyse (eller restriktionsanalyse) er en metode til at opstille DNA-profiler. Metoden kan også bruges til andre formål, f.eks. til at diagnosticere nogle genetiske sygdomme som seglcelleanæmi og Li-Fraumeni syndrom.
Metoden bruges sjælden i praksis i dag. Opstilling af DNA-profiler med RFLP kræver en ret stor mængde DNA, og metoden er generelt mere besværlig og tidskrævende end mere moderne metoder. Man arbejder dog stadig tit med RFLP i undervisningen.
Vær opmærksom på, at du også kan komme til at arbejde med DNA-profiler, som opstilles ved STR-metoden.
...
RFLP-analyse indebærer klipning af DNA med restriktionsenzymer
En RFLP-analyse indebærer, at man klipper en DNA-prøve op i mindre stykker ved hjælp af nogle bestemte restriktionsenzymer. Hvert restriktionsenzym genkender én bestemt …
...
RFLP udnytter variationer i DNA
RFLP-analyse bygger på, at DNA indeholder nogle bestemte typer variationer på tværs af menneskers genomer:
Variationer i tandemrepeteret DNA
Menneskers DNA indeholder en meget stor mængde tandemrepeteret DNA. Tandemrepeteret DNA er en basesekvens, der gentages mange gange i træk forskellige steder i DNA'ets introns. Antallet af gentagelser de forskellige steder varierer dog meget imellem forskellige mennesker. Områder i genomet med et varierende antal tandemgentagelser kaldes også VNTR (variable number of tandem repeats).
SNP (variationer på én base)
Menneskers DNA indeholder mange steder, hvor basesekvensen varierer med én enkelt base. Disse variationer skyldes punktmutationer, som er ophobet i genomet over tid. Steder med denne type variation på tværs af mennesker kaldes for SNP (single nucleotide polymorphism).
...
Fremstilling af DNA-profiler ved RFLP
En DNA-profil opstilles ved RFLP ved at udtrække alt DNA'et fra en celleprøve. DNA'et klippes herefter med flere forskellige restriktionsenzymer, og man udfører gelelektroforese på DNA'et. DNA'et i gelen mærkes til sidst med prober med fluorescerende farvestof. Prober er små stykker enkeltstrenget DNA, der kan bi…
...
Diagnosticering af genetiske sygdomme med RFLP
Nogle genetiske sygdomme kan diagnosticeres ved en restriktionsanalyse. Det gælder, hvis sygdommen skyldes en mutation, der ændrer på antallet af genkendelsessites for et bestemt restriktionsenzym.
Seglcelleanæmi
Seglcelleanæmi er et almindeligt eksempel på en sygdom, man kan diagnosticere vha. restriktionsanalyse.
Seglcelleanæmi skyldes en punktmutation i genet for proteinet β-globin…
